western blot的内参总是做不好。。。老是条带不一致

2025-05-04 10:35:21

推荐回答（4个）

回答（1）：

1，如果是组织样品确实不好做，可以先用0.45滤膜过滤一下
2，可以第一次做的时候多准备些煮好的样品，上样用一部分，其它冻-20，出来结果后根据结果再调整下一次上样的多少，这样不用重新冻融原来的样品，因为没煮过的样品冻融再测浓度会因为一些蛋白降解和沉淀的问题导致和上次成分不一样，
3，实在不行你就换个内参吧，actin，tubulin，GAPDH，不同的细胞系或者不同的组织有时候真的差挺大的

回答（2）：

条带不一致就是蛋白定量做的不准确啊
BCA法，比较精确了
一般sample冻过之后，蛋白量也会改变
最好在做WB之前测一下蛋白量，别直接用之前冻之前检测的数据去做。

回答（3）：

1. protein - blot 之前用Bradford 测一下总蛋白量，估摸一下
2. 做完第一次后，用photoshop 软件测一下各个内参条带的光密度值，这样可以给第二次调整的时候一个参考....

回答（4）：

多的样品下次就少加点少的就多加点只要看起来差不多就行了