T-DNA可随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变.

2025-05-13 21:22:39

推荐回答（1个）

回答（1）：

PCR扩增技术中，终产物一般是位于两端扩增引物中间的序列片段。如果用AD做引物，第一个问题是扩增效率问题，普通PCR酶一般仅支持2KB以下产物长度，再往上需要特殊的酶，但一般也就是10个kb，而AD间是T-DNA全长，一般比较长，普通PCR是扩增不成功的；其次是能否获得产物的问题，就算你能够把整个AD段扩增成功，扩增产物中会有非常多的AD间序列，极少量的既有AD又有部分BC的序列，二者之间的比例会是2的20次方倍以上，这与你的PCR循环次数设定有关。所以用AD扩增，BC间序列被进一步稀释，还不如不做PCR了。这里就要说一下PCR的原理了，从A引发的新DNA链的合成，在D不会终止，但因为从D引发合成的新链D1没有D后面的片段，以D1为模板，从A引发的新新链A2D1就不会含有D后面的片段，这样，第一次循环后，产物中有一半缺乏D后片段，第二次循环后，产物中有四分之三缺乏D后序列，第n次循环后，产物中有1减2的n次方的比例缺乏该片段，到时候你怎么检测如此低比例的东西呢？对于A后面的片段也是如此。所以，用AD富集的产物与BC正相反，所以用BC而非AD。