A、从试管中吸出培养液进行计数之前应将试管轻轻振荡几次，目的是使酵母菌分布均匀，A正确；B、将盖玻片盖在计数室上后，从盖玻片边缘滴加酵母菌培养液，B正确；C、若取样的小方格中酵母菌过多，难以数清，可适当稀释，最后计数的结果需要乘以稀释的倍数，C正确；D、对压在小方格界线上的酵母菌，应计数上和左两条界线及这两条界线夹角上的酵母菌，D错误．故选：D．
