什么是梅毒螺旋体特异抗体测试

　　TPHA法检测梅毒螺旋体抗体

　　一、概述：
　　梅毒螺旋体存在于病人的血液或脑脊液内，在特殊厌氧环境里可体外人工培养。当病人感染梅毒螺旋体后3-4周，可在血液中检出针对梅毒螺旋体特异性抗体，并在治疗后相当长时间内仍然可检出。在病人血清中可检出二种抗体，一种是针对非螺旋体抗原的抗体（即针对牛心肌磷脂的抗体，如RPR及国内一些EIA和金标法均是检测此非特异性抗体），这种抗体在疾病活动期可检出，但在治疗后或疾病转入慢性期后会很快下降，而另一种是针对螺旋体抗原的特异性抗体,治疗后仍可在相当长的时间内检出，在疾病的慢性期也保持高滴度反应。OMEGA TPHA 试验是一种检测针对螺旋体抗原的抗体的特异的、灵敏的被动的血凝试验。OMEGA TPHA 试剂盒的质量标准已经中国药品生物制品检定所核定。
　　二、试验原理：
　　试验血球为用梅毒螺旋体特异性抗原包被经过醛化和鞣化的鸡红细胞，对照血球为没用上述抗原包被的经过醛化和鞣化的鸡红细胞，如果是阳性标本，当和致敏的鸡红细胞混合后，抗体和抗原的结合会引起致敏血球的凝集，在血凝板底部形成凝集块，如为阴性标本，则血细胞在孔底形成致密的沉淀。
　　三、试剂盒组成： 试验细胞悬液 8.5ml 阳性对照血清 2 ml 稀释液 2 0ml
　　对照细胞悬液 8.5ml 阴性对照血清 2 ml 细胞滴管 2 支
　　以上所有试剂均为工作浓度。试剂盒中的阴阳对照血清已经1：20稀释，可直接实验不必再稀释。阳性对照的效价为1：2560左右。
　　细胞滴管的滴量为每滴75ul，其中红色滴管用于致敏血细胞，白色滴管用于对照血细胞。
　　待检标本：应用血清标本，脑脊液标本。血清标本可贮于—20℃保存，但保存不应超过4至6星期。标本不应有溶血或含有脂肪。标本要防止混入唾液，否则会影响结果的正确性。
　　四、操作方法：
　　1.在反应板的第一排：每孔加25u（1滴）稀释液
　　在反应板的第二排：每孔加100ul（4滴）稀释液
　　在反应板的第三排和第四排：每孔加25ul（1滴）稀释液
　　2.取标本25ul，加在第一排的孔中。
　　3.对样品进行以下稀释：用25 ul移液器将加样后的第一排孔中的液体混匀后取出25 ul加入第二排的孔中，混匀后再取25 ul加入第三排的孔中，混匀后，从第三排孔中吸出25 ul丢弃，另从第二排孔中取25 ul加入第四排孔中，混匀后，再从第四排孔中吸25ul丢弃。
　　4.在第四排孔中加75 ul（1滴）试验细胞悬液，在第三排孔中加75 ul（1滴）对照细胞悬液。轻轻摇晃反应板后加盖静置45—60分钟后判读结果。
　　五、结果判断：
　　1.目测：凡出现细胞凝集为阳性反应，不出现凝集者阴性反应。
　　—/不凝集：细胞沉积在板孔中央呈边缘光滑的纽扣状；
　　±/可凝：细胞沉积在板孔中央呈边缘光滑的环状；
　　+/凝集：细胞形成多边形成或不规则环状沉积。
　　2+—4+/强凝集：细胞形成边缘粗糙不规则形状或薄膜状覆盖到板孔底。
　　2.加入对照血细胞的反应孔不应出现凝集，如果出现凝集，说明存在抗血细胞抗体，应重复试验。重复试验时，应经1000rpm离心5分种，取上清液用稀释液按1：5稀释，再进行试验，如果加入试验细胞悬液仍出现凝集，可判为阳性结果。
　　3.仪器测定：可应用奥林帕斯的PK7200或改进后的雷勃MK3酶标仪。
　　六、储存4—8℃ ，切勿冷冻。注意运输和储存过程中切勿将试剂盒倒置

、梅毒螺旋体检查

（一） 检查方法

1． 暗视野显微镜检查：在皮损处，用玻片刮取组织渗出液或淋巴结穿刺液，见有活动的梅毒螺旋体。

2． 免疫荧光染色：在荧光显微镜下可见绿色的梅毒螺旋体。

3． 活体组织检查梅毒螺旋体，如用银染色法（Warthin-starry）法或（Levoaditis法)或荧光抗体染色，可查见梅毒螺旋体，呈黑褐色，有螺旋结构，位于真皮毛细血管周围。银染色的阳性结果需谨慎解释，因为类似梅毒螺旋体的其他物质易混淆。而特异性荧光检查则更为可靠。 （二） 螺旋体的鉴别

镜下检查梅毒螺旋体与雅司、地方性梅毒、品他三种非性病性螺旋体鉴别，此外还应与齿大螺旋体、齿小螺旋体、软螺旋体、生殖器螺旋体相鉴别。

1． 雅司、地方性梅毒、品他三种非性病螺旋体：形态上不能与梅毒螺旋体相区别，但流行病学、病史、临床表现可以鉴别；

2． 齿大螺旋体：为疏螺旋体，比梅毒螺旋体长，存在于口腔中，尤其在齿缝内最多；

3． 齿小螺旋体：比梅毒螺旋体短，旋距也短，运动不规则，两端较中部略宽。主要见于齿垢中； 4． 软螺旋体：为疏螺旋体，螺旋较少，运动不规律且快，常不断改变其形态。寄生于皮肤溃疡中。

5． 生殖器螺旋体：比梅毒螺旋体短小，螺旋体大而不规则，生于阴垢内，不经常清洗者检出率较高。

6． 其他：与螺旋形网状纤维、纤维蛋白细丝、纤毛、串状红细胞等呈螺旋状的物体相鉴别。

二、梅毒血清试验

根据所用抗原不同，梅毒血清试验分为以下两大类：

（一） 非梅毒螺旋体抗原血清试验，用心磷脂作抗原，测定血清中抗心磷脂抗体，亦称反应素。本试验敏感性高而特异性较低，且易发生生物学假阳性。早期梅毒患者经充分治疗后，反应素可以消失，早期未经治疗者到晚期，部分病人中反应素也可以减少或消失。目前一般作为筛选和定量试验，观察疗效，复发及再感染。 1． 性病研究实验室试验（Venereal Disease Research Laboratory test，VDRL）；用心磷脂、卵磷脂及胆固醇为抗原，可作定量及定性试验，试剂及对照血清已标准化，费用低。此法常用，操作简单，需用显微镜读取结果，缺点是一期梅毒敏感性不高。

2． 快速血浆反应素试验（Rapid Plasma reagin test， RPR）：是VDRL抗原的改良，敏感性及特异性与VDRL相似，优点是肉眼即可读出结果。

3． 不加热血清反应素玻片试验（Unheated Serum Reagin USR）也是VDRL抗原的改良，敏感性及特异性与VDRL相似。

（二） 梅毒螺旋体抗原血清试验：用活的或死的梅毒螺旋体或其成分来作抗原测定抗螺旋体抗体。这种试验敏感性和特异性均高，一般用作证实试验。这种试验是检测血清中抗梅毒螺旋体IgG抗体，即使患者经过足够治疗，仍能长期存在，甚至终身不消失，血清反应仍持续存在阳性，因此，不能用于观察疗效。

1． 荧光梅毒螺旋抗体吸收试验（FTA-ABS Test）：此法是较敏感和较特异的螺旋体试验。

2． 梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）：敏感性和特异性均高，操作简便，但对一期梅毒不如FTA-ABS试验敏感。

3． 梅毒螺旋体制动试验（Treponema Pallidum immobilization ，TPI）；用Nichol株螺旋体（活的）加病人血清（含抗体）后，在补体的参与下可抑制螺旋体的活动。如≥50%梅毒螺旋体停止活动，则为阳性。此试验特异性、敏感性均高，但设备要求高，操作难，仅供研究用。

三、基因诊断技术检测梅毒螺旋体

梅毒螺旋体不能进行体外培养。检测临床标本中梅毒螺旋体最敏感、可靠的方法是兔感染试验（RIT），RIT能证实活的梅毒螺旋体存在，是检测梅毒螺旋体常用的标准方法。然而用RIT对新生儿或成人梅毒进行常规诊断不切合实际。梅毒的血清学诊断对确定感染及治疗很有意义，但对早期梅毒诊断不敏感，对先天性及神经性梅毒的诊断不够特异。血清学试验用作先天性梅毒的辅助诊断，其首要问题是将无症状感染婴儿从非感染婴儿区别开来，这些婴儿的母亲梅毒血清试验阳性，困难在于不能将母亲体液免疫反应同婴儿的抗体反应相区别，因为母亲的IgG可传递给胎儿。另外由于IgG终身存在，所以很难评价治疗结果。血清学诊断常常又存在着假阳性。