鳄梨日斑类病毒病的理化性质是什么?

2025-05-14 12:10:26
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类病毒名称:鳄梨日斑类病毒Avocadosunblotchviroid(ASBVd)。

分类地位:鳄梨日斑类病毒属Avsunviroid,鳄梨日斑类病毒科Avsunviroidae。在国际病毒分类委员会(ICTV)中的编码为80.002.0.01.001。

类病毒异名:Avocadoinfectiouschlorosis。

类病毒提纯:按Palukaitis&Symons(1980)步骤稍作改变:30g鳄梨病组织,加90ml0.1mol/Ltris缓冲液,0.5mol/LNaCl,0.5%SDS,2.5%PVP-40,0.1mmol/L醋酸镁,pH8.5缓冲液(TSS),在室温下匀浆1min,用前加0.9gDIECA和NaCl(7.9g)再匀浆1min,匀浆物置-15℃孵育1h,10000r/min,离心20min(2℃),得50ml悬液。

CF-11-纤维素柱层析进一步纯化:按SinghandSanger(1976)提出的步骤。洗纤维素粉:取100gWatermanCF-11-纤维素粉,依次浸在1L0.1mol/LHCl,0.1mol/LNaOH,STE缓冲液(含0.1%2-巯基乙醇)中,3volSTE缓冲液,1份STE缓冲液(含35%乙醇),最后浓度为100g/L的纤维素浆。装柱:15mlSTE缓冲液(15*),10ml氯仿,10mlWSP,摇20min,离心得15ml上清液,慢慢加入8ml乙醇,使之含35%乙醇,搅匀,加入10ml洗过的纤维素浆,装入柱内。洗脱:先用3份20mlSTE缓冲液(含35%乙醇)洗脱,最后用10mlSTE缓冲液(不含乙醇)洗脱被吸附的核酸,乙醇沉淀,离心,得核酸提纯液。PAGE检测。

多数类病毒在叶绿体节分中,细胞质和线粒体节分中未见类病毒;在不变性条件下进行电泳(PAGE),染色,提取类病毒带;再在变性条件下(7mol/L尿素)进行PAGE,分开环状类病毒和线状分子;将从凝胶中提取的高纯度环状类病毒,用蔗糖梯度离心除去残余的凝胶(Palukaitisetal.,1981)。提纯的环状类病毒具侵染力(Allen,Palukaitis&Symons,1981)。

类病毒理化特性:

核酸:环状,单链RNA,含246~250核苷酸(取决于分离物和序列),分子质量0.8*105。碱基组成G20.6∶A27.5∶C17.4∶U34.4(Symons,1981),富含A+U(占62%),在类病毒中仅此一种(其他都是富含G+C,占53%~60%)。ASBVd的次生结构为类杆状,性极稳定,不易分别它的5功能域和中心保守区(CCR);在次生结构形状和稳定性方面,类似锦紫苏类病毒1号;ASBVd可溶于2MliCl,此特性又像马铃薯纺锤形块茎类病毒。

ASBVd的+-链可形成榔头结构。单榔头结构不耐热,认为双榔头结构操纵自剪切反应,尤其操纵+RNA的自剪切反应。因病组织中存在-RNA单体,ASBVd可通过rolling?circlemodel进行复制。ASBVd聚集在叶绿体中,也在此复制。

ASBVd比马铃薯纺锤形块茎类病毒(359核苷酸)(Grossetal.,1978)、菊矮化类病毒(356核苷酸)(Haseloff&Symons,1981)和柑橘裂皮类病毒(371核苷酸)(Visvaderetal.,1982;Grossetal.,1982)都小;但与前两者有18%序列相同性(Symons,1981)。分子大小与椰子死亡类病毒cadang?cadangviroid相似(J.Haseloff,N.MohamedandR.H.Symons,未发表)。

株系:两分离物,它们的核苷酸序列差异极小(Palukaitisetal.,1981)。